更新時(shí)間：2025-04-09
細(xì)胞名稱： PK-1人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞 種屬來源: 人 性別年齡： 男性種屬來源: 胰腺生長(zhǎng)特性： 貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞形態(tài): 不規(guī)則細(xì)胞樣更多細(xì)胞歡迎咨詢
| 品牌 | 研尊生物 | 貨號(hào) | YZ-X1088 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | T25或1mL凍存管 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
| 主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) |
產(chǎn)品信息
細(xì)胞名稱： PK-1人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞
種屬來源: 人
性別年齡： 男性
種屬來源: 胰腺
生長(zhǎng)特性： 貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài): 不規(guī)則細(xì)胞樣
細(xì)胞規(guī)格: 1 X 106cells/T25或1 mL凍存管
培養(yǎng)條件: RPMI1640 +10% fetal bovine serum
37 ℃, 5% CO2
凍存條件: 90% FBS + 10% DMSO
傳代方法：1:3傳代, 2-3天傳1代
細(xì)胞培養(yǎng)操作
干冰運(yùn)輸：收到細(xì)胞后需立即轉(zhuǎn)入液氮保存、或者-80°C冰箱短期凍存、或者直接復(fù)蘇
常溫運(yùn)輸：收到細(xì)胞后，請(qǐng)立即將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進(jìn)行培養(yǎng)傳代
細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)80% - 90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟
對(duì)于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，寄送前，我們會(huì)將培養(yǎng)基充滿整個(gè)培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞的脫落。
收到細(xì)胞后，請(qǐng)注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。因?yàn)檫\(yùn)輸過程中存在顛簸，且有些細(xì)胞對(duì)溫度變化也很敏感，可能存在一些細(xì)胞脫落漂浮的情況，這些細(xì)胞仍是活細(xì)胞，請(qǐng)勿丟棄，可離心富集后傳代使用。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中多余的培養(yǎng)基，至剩余5-8mL 左右，隨后根據(jù)培養(yǎng)基選擇合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶，請(qǐng)立即傳代。
對(duì)于懸浮的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管，150 g 離心 5 分鐘，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
凍存管細(xì)胞操作步驟
注意： 為保證細(xì)胞的高活率，請(qǐng)收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。
將凍存管置于37℃水浴中來回晃動(dòng)，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約1分鐘。
一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完培養(yǎng)基的離心管中，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。
用全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請(qǐng)將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。
將細(xì)胞置于含有合適CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)
吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS潤(rùn)洗一次。
加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3-5分鐘。
加入2mL全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。
將細(xì)胞懸液收集到15mL離心管里，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
懸浮細(xì)胞傳代可參考以下方法：
一、直接傳代法
1、待懸浮細(xì)胞長(zhǎng)滿至 80%～90%（細(xì)胞懸液變黃），即可傳代；
2、用吸管吸棄細(xì)胞懸液 1 / 2~1 / 3；
3、加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
二、離心傳代法（在發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞碎片的情況下）
1、將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)；
2、150 g 離心 5 min，棄去上層清液；
3、使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、吸管吸取適量細(xì)胞懸液，裝入新的培養(yǎng)瓶，再加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存操作
1. 1000rpm離心5分鐘去掉上清。加1 mL血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻， DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1 x 106/mL，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
2. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80°C冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。
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