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更新時(shí)間：2025-11-24
| 中文名稱:NKL人NK細(xì)胞 | 英文名稱:NKL |
| 保存條件: 37℃ | 純度規(guī)格: 1*10^6/T25 |
| 產(chǎn)品類別: 細(xì)胞 細(xì)胞系 |
產(chǎn)品名稱：NKL人NK細(xì)胞
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無(wú)血清凍存液（貨號(hào)：C7001） |
細(xì)胞描述 | 本庫(kù)的細(xì)胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 | ||
培養(yǎng)備注 | 用無(wú)菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過(guò)渡培養(yǎng) | ||
NKL人NK細(xì)胞到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基）
NKL人NK細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a）、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
三、細(xì)胞凍存：（注：無(wú)血清凍存液凍存細(xì)胞的方法請(qǐng)參考我司貨號(hào)：C7001）
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
NKL人NK細(xì)胞部分相關(guān)細(xì)胞如下：
垂體原代細(xì)胞
小腸成纖維原代細(xì)胞
前列腺成纖維原代細(xì)胞
肝內(nèi)膽管上皮原代細(xì)胞
肺巨噬原代細(xì)胞
小鼠肝成纖維原代細(xì)胞
小鼠神經(jīng)膠質(zhì)原代細(xì)胞
小鼠勁動(dòng)脈成纖維原代細(xì)胞
小鼠皮膚角化原代細(xì)胞
小鼠小丘腦神經(jīng)膠質(zhì)原代細(xì)胞
小鼠I型星形膠質(zhì)原代細(xì)胞
胎鼠I型星形膠質(zhì)原代細(xì)胞
小鼠腸間質(zhì)原代細(xì)胞
小鼠肝上皮原代細(xì)胞
小鼠肺周原代細(xì)胞
小鼠肺動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞
小鼠骨髓PBMC原代細(xì)胞
小鼠腎周原代細(xì)胞
小鼠腎系膜成纖維原代細(xì)胞
小鼠食管胃粘膜成纖維原代細(xì)胞
小鼠胃粘膜成纖維原代細(xì)胞
小鼠心肌內(nèi)皮原代細(xì)胞
小鼠主動(dòng)脈成纖維原代細(xì)胞
小鼠子宮上皮原代細(xì)胞
骨髓源性肥大原代細(xì)胞
自然殺傷T原代細(xì)胞
脾臟CD4+T原代細(xì)胞
腦動(dòng)脈血管平滑肌原代細(xì)胞
肌衛(wèi)星原代細(xì)胞
星形膠質(zhì)原代細(xì)胞
脊髓神經(jīng)元
腦微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞
骨髓間充質(zhì)干原代細(xì)胞
脂肪微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞
前脂肪原代細(xì)胞
角質(zhì)形成原代細(xì)胞
皮膚成纖維原代細(xì)胞
髓核原代細(xì)胞
骨骼肌成纖維原代細(xì)胞
滑膜成纖維原代細(xì)胞
子宮內(nèi)膜上皮原代細(xì)胞
輸卵管平滑肌原代細(xì)胞
輸卵管上皮原代細(xì)胞
卵巢間質(zhì)原代細(xì)胞
海綿體平滑肌原代細(xì)胞
睪丸支持原代細(xì)胞
胸腺原代原代細(xì)胞
胸腺原代細(xì)胞
肝星狀原代細(xì)胞
冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞
冠狀動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞
頸動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞
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腹腔主動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞
腹腔主動(dòng)脈外膜成纖維原代細(xì)胞
股動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞
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肺動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞
肺大動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞
肺大動(dòng)脈外膜成纖維原代細(xì)胞
氣管上皮原代細(xì)胞
氣管平滑肌原代細(xì)胞
支氣管上皮原代細(xì)胞
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肺成纖維原代細(xì)胞
清道夫魚魚唇表皮原代細(xì)胞
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羊肺微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞
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